Обратных транскриптов полимеразная цепная реакция кДНК-ПЦР РНК-ПЦР

Обратных транскриптов полимеразная цепная реакция, кДНК-ПЦР, РНК-ПЦР * зваротных транскрыптаў полімеразная ланцуговая рэакцыя, кДНК-ПЛР, РНКПЛР * reverse transcription polymerase chain reaction or RT-PCR or cDNA-PCR or RNA-PCR — процедура амплификации (см.) РНК in vitro с использованием ретровирусной обратной транскриптазы (см.) или термостабильной Therminus thermophilus (Tth) ДНК-полимеразы (см.) для получения кДНК на матрице РНК. кДНК затем амплифицируется методом обычной ПЦР. Tth-обратная транскриптаза катализирует как обратную транскрипцию в присутствии MnCl2, так и амплификацию образовавшейся кДНК в присутствии MnCl2. Более того, ее каталитическая активность не снижается при повышении реакционной температуры с целью дестабилизации вторичной структуры РНК и эффективного отжига праймера (см.). Т. обр., при использовании Tth-фермента все реакции можно осуществить в одной пробирке. РНК-ПЦР позволяет амплифицировать кДНК с очень малых количеств очищенных иРНК, тРНК, рРНК и вирусных РНК, а также обнаруживать специфические РНК при очень малом количестве копий, поэтому метод применяется для анализа экспрессии генов на уровне РНК. РНК-ПЦР-метод можно использовать также и для одновременного изучения трансляции генов in vitro.